【CMDE】微卫星不稳定性（MSI）检测试剂盒（荧光PCR-毛细管电泳法）注册技术审评报告（CSZ2300345）

作者：小编更新时间：2025-02-28 点击数：

受理号：CSZ2300345

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：微卫星不稳定性（MSI）检测试剂盒（荧光PCR-毛细管电泳法）

产品管理类别：第三类

申请人名称：上海普洛麦格生物产品有限公司

国家药品监督管理局

医疗器械技术审评中心

基本信息

一、申请人名称上海普洛麦格生物产品有限公司

二、申请人住所上海市闵行区新骏环路 88 号 12 幢 B 栋

三、生产地址上海市闵行区新骏环路 88 号 12 幢 102 和 202 室、上海市闵行区新骏环路 138 号 3 幢 101 室、上海市闵行区新骏环路 188号 8 幢 303 室 B 区和 C 区

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分产品主要组成成分见表 1：

表 1 试剂盒主要组成成分

注：试剂盒各组分应在有效期内使用，不同批次的试剂盒组分不得混用。

（二）产品预期用途

本试剂盒用于体外定性检测结直肠癌患者肿瘤组织 FFPE样本基因组 DNA 中的 8 个微卫星位点(NR-21，BAT-25，BAT-26，Mono-27，BAT-52，BAT-56，BAT-59，BAT-60)，通过与正常对照样本检测结果对比，确定是否发生了微卫星序列长度变化。根据发生序列长度变化的微卫星位点数量，将结直肠癌分为微卫星高度不稳定、微卫星低度不稳定以及微卫星稳定三种微卫星状态。

本试剂盒的检测结果用于辅助鉴别结直肠癌中可能的林奇综合征患者。本产品的应用应参考临床相关诊疗指南的要求，检测结果的解读应结合其他临床诊断信息、疾病家族史及实验室检测信息进行综合分析。本产品尚未进行有关用药指导的临床性能评价。

（三）产品包装规格

48 测试/盒。

（四）产品检验原理本试剂盒基于荧光 PCR-毛细管电泳技术，对 8 个单核苷酸重复微卫星位点(NR-21, BAT-25, BAT-26, Mono-27, BAT-52,BAT-56, BAT-59, BAT-60)不稳定性进行分析，同时含有 2 个五核苷酸重复微卫星位点 Penta C 和 Penta D，作为内对照，用于同一样本来源的鉴定，检测潜在的样品混杂或污染。

首先分别提取正常组织与癌组织样本的 DNA，使用本试剂盒中的 5×微卫星引物和 5×微卫星反应液配制成 PCR 反应液，对正常组织与癌组织 DNA 进行 PCR 扩增，用人基因组 DNA(10 ng/μL)作为阳性扩增对照，用无核酸酶水作为阴性扩增对照，扩增产物和分子量标志物使用 3500Dx 基因分析仪进行电泳，最后使用GeneMapper®软件进行数据分析，对比正常组织与癌组织的检测结果，判定癌组织样本位点状态。

表 2 检测位点信息表

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择

本产品的主要原材料包括引物、PCR 反应液、人基因组 DNA和分子量标记物，均通过外购的方式获得。其中引物由申请人自行设计，委托专业的合成公司合成。通过功能性试验，申请人筛选出最佳原材料和生产商，同时制定了各主要原材料质量标准并经检验合格。

2.企业参考品设置情况

该产品企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品和重复性参考品，分别由细胞系和临床 FFPE 样本制备而成。

本试剂盒设置了阳性对照和阴性对照，用于检测过程中试剂和仪器的质量控制。此外本试剂盒含有 2 个五核苷酸重复标志物 Penta C 和 Penta D，用于判断肿瘤组织和正常组织是否来源于同一个体，避免因样本混淆造成的误判。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人对试剂盒反应体系的研究包括 PCR 反应液用量、引物用量、核酸用量的确定；对反应条件的研究包括扩增循环数、扩增温度和时间、毛细管进样时间、分离胶选择、分析软件等的确定；对样本要求、样本用量等进行了研究。通过功能性实验，确定了最佳的反应体系。申请人根据试剂盒中组分的性能参数研究结果，确定了最佳的生产工艺。

（三）分析性能评估

本产品分析性能评估内容主要包括：准确度、精密度、最低检测限、分析特异性等。

准确度研究中，使用 3 批成品试剂盒在适用机型上对阳性参考品和阴性参考品进行检测，检测结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为 100%。同时使用若干临床样本对试剂盒准确性进行了研究，包括了 MSS、MSI-L、2 个～8 个不稳定位点的不同位点组合类型的 MSI-H 样本，研究结果显示试剂盒检测结果与 Sanger 测序法结果一致。精密度研究中，申请人采用 MSS、不同浓度水平的 MSI-H细胞系参考品和临床样本对批内/批间、日内/日间、不同人员间、不同仪器间和实验室间精密度进行评价，其精密度检测结果均一致。最低检测限研究从肿瘤 DNA 含量和 DNA 加样量两个方面进行评价。

采用阴性、阳性细胞系混合样本和结直肠癌 FFPE 样本，采用不同梯度浓度/比例样本进行检测，以 95%的阳性检出率作为标准，最终确定本试剂最低检出限为在 5ng 基因组 DNA 背景下，对肿瘤 DNA 含量 10%的检测限参考品进行检测，结果均为微卫星高度不稳定。分析特异性研究包含野生型耐受性验证、交叉反应研究和干扰研究。采用高浓度野生型核酸样本进行验证，结果显示本试剂盒可以耐受 20ng/μL 及以下的野生型 DNA。

交叉反应评价中，检测绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙氏门菌、大肠埃希氏菌、白色念珠菌、奇异变形杆菌、屎肠球菌、痢疾志贺氏菌、普通变形杆菌、小鼠 DNA，均未与本产品发生交叉反应。干扰试验结果显示，临床样本中可能存在的潜在干扰物如甘油三酯（37 mM）、血红蛋白（2 mg/mL）、乙醇（5%）、中性福尔马林、石蜡（1%）以及治疗性药物氟尿嘧啶（3 mmol/L）均不干扰本试剂盒的检测结果。申请人采用临床样本进行了核酸提取试剂盒的性能研究，根据核酸提取物纯度、浓度等，确定了配套使用的核酸提取试剂。

（四）阳性判断值研究

采用结直肠癌临床样本进行阳性判断值研究，包括阳性判断值的确定和验证两个部分，共计入组有效样本数 570 例。采用一定数量的临床样本进行阳性判断值的确定，通过位点位移范围分析、受试者特征（ROC）曲线分析确定试剂盒的阳性判断值，再用另外一批临床样本对阳性判断值进行验证。最终确定本产品的阳性判断值为：将正常组织与肿瘤组织的每个相应微卫星位点相比，若在待检测样本的肿瘤组织中出现新的等位基因，并且位移超过 3bp，则认为此位点为微卫星不稳定。

若≥2 个微卫星位点表现为不稳定，则判断样本为微卫星高度不稳定性(MSI-H）；若 0 或 1 个微卫星位点表现为不稳定，则判断样本为微卫星稳定（MSS）或微卫星低度不稳定（MSI-L）。

（五）稳定性研究

申请人对本产品实时稳定性、运输稳定性、开瓶稳定性、冻融稳定性和样本稳定性进行研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时间。实时稳定性研究：将 3 批试剂盒储存于规定储存条件下，分别在 0、3、6、9、12、15、18、21、24、25 和 26 个月对阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、检测限和重复性进行考察，各项性能指标均符合要求，确定产品在-20℃±5℃条件下，有效期为 24 个月。此外，申请人对产品的运输稳定性、开瓶稳定性、冻融稳定性和样本稳定性分别进行了研究。结果显示，产品性能均能满足产品说明书声称。

三、临床评价概述

申请人在南方医科大学南方医院、四川大学华西医院、浙江大学医学院附属第二医院和中日友好医院共 4 家临床机构完成了临床试验。入组病例均为结直肠癌患者。临床试验包括三部分内容：

第一部分，采用试验用体外诊断试剂与 MMR 蛋白免疫组化法进行对比试验，共纳入 1003 例样本，其中 MSI-H 319 例，MSI-L/MSS 684 例。试验结果显示，两种方法的阳性符合率为99.4%（95%CI：97.7%，99.8%），阴性符合率为 98.9%（95%CI：97.9%，99.50%），总符合率为 99.1%（95%CI：98.3%，99.5%）。

第二部分，采用试验用体外诊断试剂与结直肠癌中疑似林奇诊断的临床参考标准，即疑似林奇相关基因的胚系致病突变（NGS 方法）进行比较研究，共纳入 389 例样本，其中疑似林奇综合征患者样本 75 例，非疑似林奇综合征患者样本 314 例。结果显示：试验体外诊断试剂的灵敏度为 97.3%（95%CI：90.8%，99.3%），特异度为 92.9%（95%CI：89.6%，95.3%）。

第三部分，采用试验用体外诊断试剂检测结果与 Sanger测序检测结果进行比较研究，结果显示：BAT-25 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：96.9%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.5%，100%）；BAT-26 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.5%，100%）；MONO-27位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97.8%，100%），阴性符合率为 99.2%（95%CI：95.8%，99.9%）；NR-21 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.5%，100%）；BAT-52 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97.1%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.4%，100%）；BAT-56位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97.0%，100%），阴性符合率为 99.0%（95%CI：94.8%，99.8%）；BAT-59 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：97.0%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.4%，100%）；BAT-60 位点的阳性符合率为 100%（95%CI：96.9%，100%），阴性符合率为 100%（95%CI：96.5%，100%）。

综上所述，该产品临床试验设计符合《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的相关要求。临床试验结果显示该产品临床性能满足要求。

四、产品受益风险判定

（一）受益评估

中国已成为全球结直肠癌每年新发病例数和死亡病例数最多的国家，结直肠癌严重影响和威胁我国居民身体健康。林奇综合征占所有结直肠癌病例的 2%～4%，这种遗传综合征是由DNA 错配修复基因的胚系突变引起的。按照现有疾病诊疗流程，疑似林奇综合征的患者可通过免疫组化方法检测 MMR 蛋白或通过微卫星不稳定性分析进行检测，以初步确定可能患有林奇综合征的患者，然后再通过 DNA 错配修复基因（MMR）的胚系突变检测对林奇综合征进行确诊。

(二)风险评估

申请人对已知危险（源）进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险（源）的风险是否达到可接受水平，并对具体措施进行实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平是否可接受。

本产品存在假阴性的可能，针对假阴性病例临床上可能延误疾病治疗，说明书中已明确疾病确诊应结合患者症状/体征以及其它检查方法等综合考虑，检测结果阴性也不能排除林奇综合征的可能；该产品存在假阳性的可能，说明书中已明确检测结果阳性不作为林奇综合征确诊的唯一依据，该类病例临床上应结合病例其他诊断及检测方法进一步确认病例状态。

本产品通过产品说明书明确了本产品的局限性，降低产品临床应用风险。产品风险可接受。警示及注意事项：产品说明书中介绍了该产品检验方法的局限性及使用中的注意事项。

综合评价意见

本申报项目属于创新医疗器械（创新审查受理号：CQTS1800234）。依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第 739 号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第 48 号）等相关医疗器械法规与配套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价, 申报产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，经系统评价后，建议准予注册。

2025 年 1 月 24 日

来源：CMDE

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