【CMDE】铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌核酸检测试剂盒注册技术审评报告

作者：小编更新时间：2025-02-28 点击数：

受理号：CSZ2400235

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌核酸检测试剂盒（数字PCR法）

产品管理类别：第三类

申请人名称：领航基因科技（杭州）有限公司

国家药品监督管理局

医疗器械技术审评中心

基本信息

一、申请人名称

领航基因科技（杭州）有限公司

二、申请人住所

浙江省杭州市萧山区南阳街道横蓬园区红山工业区

三、生产地址

杭州市滨江区滨安路688号6号楼402室、5号楼1409/2305/2309室、2幢E楼349/351/367室

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

详见表1。

表1.产品主要组成成分

	组分名称	规格	数量	组成成分
A部分	反应液	10μL/管	24	引物、探针、dNTP、缓冲液、TaqDNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶
	阳性质控品	1.1mL/管	2	四种细菌核酸、缓冲液
	阴性质控品	1.1mL/管	2	非细菌核酸、缓冲液
	内对照	250μL/管	1	人工合成核酸、缓冲液
B部分	微流控芯片	4测试/片	6	微流控芯片、微液滴生成油

注注：A部分中不同批号试剂盒中的组分不可以互换使用。

（二）产品预期用途该产品用于体外定性检测人血浆样本中铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌四种细菌核酸。

用于血流感染的辅助诊断。本产品检测结果不作为患者病情评价的唯一指标，必须结合临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。

（三）产品包装规格

24测试/盒。

（四）产品检验原理

本试剂盒针对四种细菌（铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺克雷伯菌、鲍曼不动杆菌）核酸保守区设计特异性引物和荧光探针，采用数字PCR技术定性检测样本中上述四种细菌的游离DNA。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择本产品主要原材料包括引物、探针、dNTP、TaqDNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶和微流控芯片，主要原材料均为外购方式获得。

申请人制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。2.企业参考品设置情况申请人设置了企业参考品用于产品的准确性、灵敏度、特异性和精密度评价，包括23个阳性参考品、8个阴性参考品、1个检测限参考品和3个精密度参考品。

阳性参考品由试剂盒检测范围内靶标菌多个亚型的片段化DNA及阴性血浆样本制备而成；阴性参考品由试剂盒检测范围外的非靶标菌片段化DNA及阴性血浆样本制备而成；检测限参考品由试剂盒检测范围内靶标菌片段化DNA及阴性血浆样本制备而成；精密度参考品由中等阳性精密度参考品、弱阳性精密度参考品和阴性精密度参考品组成，中等阳性和弱阳性精密度参考品由靶标菌片段化DNA及阴性血浆样本制备。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过对试剂反应液，阴阳性质控品和内对照配制的研究，确定了最佳生产工艺。申请人还对微流控芯片的来料控制、生产和质控参数进行了研究和验证。

申请人对反应体系中的引物探针浓度和用量、dNTP用量、TaqDNA聚合酶用量、氯化镁用量、尿嘧啶DNA糖基化酶用量、反应体积、反应条件、样本用量和样本处理方式等进行筛选、优化和验证，最终确定了最佳反应体系。

（三）分析性能评估

产品分析性能评估内容主要包括：准确度、最低检测限、精密度、分析特异性（交叉反应和干扰实验）、包容性等。申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的三批产品在适用机型上的分析性能评估资料。

准确度研究中，申请人使用三批成品试剂盒检测企业参考品，结果显示企业参考品阳性符合率和阴性符合率均为100%。申请人还通过检测临床样本，对比该产品与Sanger测序检测结果的一致性来评估准确度，其中铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌检测结果的一致性分别为90%、100%、95.2%和95.2%。

低检测限研究中，对阳性样本进行梯度稀释，使用三批成品试剂盒对每个浓度样本重复检测20次，计算各浓度样本阳性检出情况，以阳性检出率95%及以上的浓度作为检出限浓度。然后使用三批成品试剂盒对稀释至检出限浓度水平的各样本进行检出限验证。最终确认本试剂盒的检出限：铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的检出限均为50copies/mL。

精密度研究中，申请人使用三批成品试剂盒、由两名操作者、分别在三套适用机型上、连续20天检测企业精密度参考品R1（中等阳性精密度参考品）、R2（弱阳性精密度参考品）、临床阴性样本、临床弱阳性样本和临床中等阳性样本，分别评价了该产品批内、批间及日内、日间、操作者间精密度，产品的重复性、再现性、日间精密度和批间精密度研究结果表明CV值均≤10%。

分析特异性研究包含交叉反应研究和干扰研究。交叉反应研究使用三批成品试剂盒对本试剂盒检测范围外的血流感染常见病原菌进行交叉反应评价，包括奇异变形菌、头葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、溶血葡萄球菌、粪肠球菌、白色念珠菌、光滑念珠菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、人葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞菌、布氏假单胞菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、嗜肺军团菌嗜肺亚种、隐球菌、卡他布朗汉姆氏菌、产酸克雷伯菌、摩氏假单胞菌。结果表明，本产品与试剂盒检测范围外的28种常见血流感染病原菌均无交叉反应。

干扰研究使用三批检测试剂，对各种可能的内源性及外源性干扰物质进行评价。结果显示：内源性干扰物质人胆红素（34.2µmol/L）、人血红蛋白（20mg/mL）、甘油三酯（0.56mmol/L）、人血红素（0.2mg/mL）以及外源性干扰物质美罗培南（300µg/mL）、亚胺培南（20µg/mL）、利奈唑胺（40µg/mL）、左氧氟沙星（14µg/mL）、多黏菌素B（24µg/mL）、替加环素（2.6µg/mL）、阿莫西林-克拉维酸（5.6mg/mL）、氨苄西林-舒巴坦（110mg/mL）、头孢哌酮-舒巴坦（259µg/mL）、替卡西林-克拉维酸（100µg/mL）、头孢曲松（151µg/mL）、头孢他啶（120mg/mL）、头孢吡肟（193µg/mL）、氨曲南（125µg/mL）、头孢西丁（110µg/mL）、庆大霉素（10µg/mL）、阿米卡星（30µg/mL）、氯霉素（12µg/mL）、米诺环素（7µg/mL）、环丙沙星（46µg/mL）、头孢美唑（188µg/mL）、磷霉素（90µg/mL）、氨苄西林（110mg/mL）、甲氨苄啶-磺胺甲噁唑（122µg/mL）、多西环素（2.5µg/mL）不会影响试剂盒检测结果的判定。

争性干扰研究使用三批检测试剂，对病原体易共存的近源菌的阳性样本进行评价。结果显示：在高浓度的奇异变形菌、头葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、阴沟肠杆菌、产酸克雷伯菌、溶血葡萄球菌、粪肠球菌、白色念珠菌、光滑念珠菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、人葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞菌、布氏假单胞菌、脑膜炎奈瑟菌、嗜肺军团菌嗜肺亚种、黏质沙雷菌、卡他布朗汉姆氏菌、咽峡炎链球菌、摩氏假单胞菌、缓症链球菌存在的情况下，对四种靶标菌的检测结果无影响。

包容性研究中，申请人对具有时间和区域特征性的不同来源的铜绿假单胞菌（ST244型、ST463型、ST274型、ST235型和ST313型）、大肠埃希氏菌（出血性大肠埃希氏菌、肠致病性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌、致泻大肠埃希氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌、志贺毒性大肠埃希氏菌和肠道聚集性大肠埃希氏菌）、肺炎克雷伯菌（肺炎亚种、肺炎克雷伯菌（臭鼻克雷伯氏菌）和肺炎克雷伯菌（鼻硬结克雷伯氏菌）亚种）、鲍曼不动杆菌（ST2型、ST40型、ST221型、ST106型和ST195型）进行评价，结果符合要求。

（四）阳性判断值研究

申请人收集来自临床机构的血液样本进行阳性判断值的建立和验证研究。其中阳性判断值建立共纳入458例样本，采用ROC曲线的方法进行研究，采用Sanger测序法确认样本的性质。通过统计分析确定铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌对应的阳性判断值均为0.35copies/µL。另外纳入151例样本进行阳性判断值的验证，结果显示基于前述建立的阳性判断值进行结果统计分析，四种靶标菌检测结果与对照方法的阳性符合率均为100%，阴性符合率为93.75%～96.77%，总符合率为96.67%～98.33%，本试剂盒阳性判断值设置合理。

（五）稳定性研究

申请人对试剂的货架有效期内稳定性、运输稳定性、使用稳定性以及样本稳定性进行了研究，确定了在各种条件下试剂及临床样本的有效保存时间。

实时稳定性研究：采用三批试剂储存于-20±5℃条件，自生产日期起，分别于第0个月、第3个月、第6个月、第9个月、第12个月和第13个月进行外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检测限和精密度检测，确认试剂在-20±5℃条件下可稳定保存12个月。

三、临床评价概述

申请人在浙江大学医学院附属邵逸夫医院、东南大学附属中大医院、浙江省人民医院、嘉兴市第二医院、宁波市医疗中心李惠利医院、浙江大学医学院附属第一医院、浙江大学医学院附属第二医院、浙江省台州医院、浙江省立同德医院、树兰（杭州）医院、浙江省中医院共11家机构完成了临床试验。采用试验用体外诊断试剂与血流感临床诊断参考标准血培养法进行比较研究试验，确认本产品的临床性能。临床试验入组病例包括：临床试验机构重症监护室、血液科、感染科、泌尿外科等诊治的疑似血流感染患者，入组患者应符合脓毒症的诊断标准。临床试验共入组病例2251例。针对大肠埃希菌，阳性病例256例，阴性病例1995例，试验结果显示，本产品与临床参考方法对比的灵敏度为100%（95%CI：98.52%，100%），特异度为90.48%（95%CI：89.11%，91.69%）；针对肺炎克雷伯菌，阳性病例273例，阴性病例1978例，试验结果显示，本产品与临床参考方法对比的灵敏度为99.63%（95%CI：97.95%，9.94%），特异度为91.25%（95%CI：89.93%，92.42%）；针对鲍曼不动杆菌，阳性病例80例，阴性病例2171例，试验结果显示，本产品与临床参考方法对比的灵敏度为100%（95%CI：95.42%，100%），特异度为95.03%（95%CI：94.03%，95.86%）；针对铜绿假单胞菌，阳性病例82例，阴性病例2169例，试验结果显示，本产品与临床参考方法对比的灵敏度为100%（95%CI：95.52%，100%），特异度为97.79%（95%CI：97.08%，98.33%）。临床试验结果显示本产品与临床参考方法一致性良好。

四、产品受益风险判定

据《YY/T 0316-2016医疗器械风险管理对医疗器械的应用》对该产品进行风险分析。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

（一）产品获益

该产品用于体外定性检测人血浆样本中铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌四种细菌核酸。临床上用于血流感染的辅助诊断，提供给患者更多一种血流感染辅助诊断方法的选择。本产品的检查结果仅供临床参考，不建议作为血流感染诊治的唯一依据，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

（二）风险评估

根据申请人提供的申报资料，经综合评价，在目前认知水平上，认为该产品上市带来的受益大于风险。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

1.不合理的样本采集、转运、储存、处理以及不当的实验操作和不适宜实验环境均有可能导致错误的检测结果。

2.本试剂盒限于人血浆样本的检测，只适用于规定的适用机型。

3.本试剂盒检测的靶序列为四种细菌各自特异的基因序列，该靶序列在各细菌间都是高度保守且稳定。但如果在靶序列处发生基因突变，则有可能造成假阴性结果，即发生漏检。

4.本试剂盒检测结果可供临床参考，阴性结果仅说明低于本试剂盒的检测限值但不能完全排除感染的可能。

综合评价意见

依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第739号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第48号）等相关医疗器械法规与配套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价,申报产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，建议准予注册。

2025年01月24日

附件：产品说明书