【CMDE】呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）注册技术审评报告（CSZ2300334）

作者：小编更新时间：2024-12-02 点击数：

受理号：CSZ2300334

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：呼吸道病原体六重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

产品管理类别：第三类

申请人名称：北京博晖创新生物技术集团股份有限公司

国家药品监督管理局

医疗器械技术审评中心

基本信息

一、申请人名称北京博晖创新生物技术集团股份有限公司

二、申请人住所北京市昌平区生命园路 9 号院

三、生产地址北京市昌平区生命园路 9 号院

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分试剂盒的主要组成成分见下表：

备注：

1. 不同规格或批次的试剂盒组分不得混用。

2. 需要但未提供的材料和设备：200μL 移液器及配套枪头，博晖微流控仪器配套芯片(货号：130000102)和枪头。

（二）产品预期用途

本产品用于定性检测人咽拭子样本中的呼吸道病原体，包括甲型流感病毒（季节性 H1N1、新型甲型 H1N1 流感病毒（2009）、H3N2、H5N1、H7N9）、乙型流感病毒（Victoria 系和 Yamagata 系）、腺病毒（B 组、C 组、E 组）、呼吸道合胞病毒（A 亚型和 B 亚型）、肺炎支原体和百日咳鲍特菌。本产品可区分样本中上述 6 种病原体，但不区分同一病原体的具体型别，检测结果可用于呼吸道病原体感染的辅助诊断。

（三）产品包装规格

12 测试/盒，4 测试/盒。

（四）产品检验原理

本试剂盒以待检测病原体的保守序列为靶序列，设计特异性 PCR扩增引物及 Taqman 探针，采用一步法 RT-PCR 对目标靶点进行扩增和实时荧光检测并绘制出扩增曲线，根据扩增曲线的 Ct 值判断样本的阴阳性。

试剂盒设计了内参及外标质控品（阳性、阴性质控品）对检测过程进行质量控制。内参采用人核糖核酸酶P（Ribonuclease P，RNaseP）基因设计引物探针，通过检测样本中内参监测待测样本质量、提取及荧光 PCR 过程。试剂盒设置阴、阳性质控品，用于监测提取及荧光PCR 过程。

同时引入 dUTP/UDG 防污染系统，以保障检测过程的准确性。本产品依托微流控技术，在配套芯片（泵液芯片模块，以下简称“芯片”）上实现从样本到结果的一站式操作。只需将试剂、试剂架和芯片放入仪器的指定位置，将待测样本加入芯片的加样孔中，点击鼠标加载运行程序，仪器就可以实现核酸提取纯化、PCR、荧光采集及结果判读。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

本产品在制备过程中主要原材料包括 Carrier RNA、磁珠、引物、探针、扩增反应液、含 FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV 假病毒、M.P 质粒、B.P 质粒和 HEK293 细胞的混合液。

其中 Carrier RNA、磁珠、引物、探针、扩增反应液、FluA、B 假病毒、RSV 假病毒，AdV假病毒、M.P 质粒、B.P 质粒为外购，HEK293 细胞为申请人自行生产。申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性试验，筛选出合格供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。

企业参考品和质控品的设置情况本产品企业参考品包括阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品和精密度参考品。参考品均采用病原体培养物制备而成。组成如下：阳性参考品：20 份，由试剂盒检测位点各个基因型别的病原体培养物组成。

阴性参考品：10 份，由试剂盒检测范围外的病原体培养物组成。精密度参考品：3 份，由中强阳性、弱阳性和阴性浓度水平的病原体培养物组成。检测限参考品：20 份，由包含试剂盒检测位点各个基因型别的最低检测限浓度水平的病原体培养物组成。

本试剂盒设置了阴性质控品为 HEK293 细胞；阳性质控品为含六个目标靶点基因的假病毒（质粒）和 HEK293 细胞，用于检测过程中试剂和仪器的质量控制。

（二）生产工艺及反应体系研究

申请人通过企业内部参考品试验确定最佳的生产工艺及反应体系，包括：核酸提取试剂、PCR扩增试剂和质控品的配液工序、分装工序及组装工序等，同时对蛋白酶K、Carrier RNA、磁珠、裂解液C、漂洗液1A、漂洗液2A、异丙醇、润洗液、洗脱液、硅油等试剂组分使用量以及样本上样量等条件进行了研究，并对反转录条件、PCR 扩增程序、反应体积等反应条件进行研究，还包括对样本类型的研究、样本稳定性的研究。申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳的生产工艺。

（三）分析性能评估

本试剂盒分析性能评估主要包括：包括阴阳性符合率（准确性）、精密度、特异性、最低检出限，包容性等，申请人提交了质量管理体系下生产的三批产品在适用机型上的性能评估资料。

1.准确度

在准确度研究中，申请人采用三批试剂盒对企业参考品及临床样本在所有适用机型上进行准确度评价。结果表明检测企业参考品阴性符合率为 100%，阳性符合率为 100%；检测临床样本，与对比试剂检测结果总一致率 96.08%，阳性符合率为 96.34%，阴性符合率为95.00%；与一代测序检测结果全部一致。

2.精密度

精密度研究中，申请人使用三批试剂对阴性临床样本 2 份、临界阳性临床样本 9 份、中阳性临床样本 9 份，共 20 份临床样本进行精密度研究。重复性和室内精密度评价试验模型为 20×2×2，实验室间精密度评价试验模型为 3×5×5。研究结果表明产品的重复性、室内精密度、再现性精密度和批间精密度 CV 均≤5%，满足产品技术要求。

3.特异性分析

特异性研究包括交叉反应研究、竞争性干扰研究和内外源干扰研究。在交叉反应性能评估中，申请人使用一批试剂对试剂盒检测范围内 6 个病原体之间及与检测范围内病原体有相同基因或基因序列有同源性、呼吸道常见病原体等试剂盒检测范围外的 43 种病原体，包括副流感 1、副流感 2、副流感 3、副流感 4、肠道病毒 EV71、EB 病毒、人巨细胞病毒、肺炎衣原体、鼻病毒 A30 型、人偏肺病毒 A2 型、博卡病毒、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 14 型、白念珠菌、嗜肺军团菌、干乳酸杆菌、副百日咳博德特氏菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、卡他莫拉菌、唾液链球菌、棒状杆菌属、化脓性链球菌、星状诺卡氏菌、黏质沙雷氏菌、柠檬酸杆菌属、新型隐球酵母、大肠埃希氏菌、鲍曼不动杆菌、绿脓假单胞菌、洋葱伯克霍尔德氏菌、纹带棒杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、胺胨罗斯氏菌、烟曲霉、黄曲霉、脑膜炎奈瑟菌、口腔链球菌、单纯疱疹病毒 I 型、水痘带状疱疹病毒、奈瑟氏菌属、肺孢子菌进行交叉反应评价，结果表明试剂盒检测范围内的 6 个病原体之间没有交叉反应，与检测范围内病原体有相同基因或基因序列有同源性、呼吸道常见病原体等试剂盒检测范围外的 43种病原体无交叉反应。

在竞争性干扰研究中，申请人使用三批试剂对同一反应体系内不同病原体间的竞争性干扰进行评估，根据临床上常见的呼吸道病毒混合感染情况，分析同一反应体系内高浓度病原体对低浓度病原体检测的影响。

结果表明样本中存在同一体系内的两种或三种靶标时，不会出现内部竞争抑制作用。在干扰研究中，申请人使用一批试剂对鼻咽中潜在的 29 种内、外源性干扰物质（包括全血、粘蛋白、鼻和咽喉中用于缓解鼻塞、鼻腔干燥、刺激或哮喘和过敏症状的药物，以及抗生素和抗病毒药物），使用单阳临界阳性水平及混合阳临界阳性水平样本进行检测。结果表明，内源物质 2.5%（w/v）粘蛋白、2%全血及高浓度人体细胞（106 个/mL，内参）不影响检测结果。

采样过程中可能引入的干扰物质：15%（v/v）羟甲唑啉、50 mg/L 地塞米松、100 mg/mL 曲安奈德、320 mg/L布地奈德、10 mg/mL 孟鲁司特纳、50 mg/L 金刚烷胺、7.5 mg/L 利巴韦林、7.5 mg/L 奥司他韦、10 mg/mL 左氧氟沙星、10 mg/mL 诺氟沙星、30%漱口水、500 mg/L 莫匹罗星、1%（v/v）NaCl、1.7 mg/mL 薄荷脑、100 mg/L 妥布霉素，10 mg/mL 盐酸非索非那定，150 mg/L 莫米松，100 μg/mL 苯福林、250 μg/mL 倍氯美松、10μg/mL 氟尼缩松、250μg/mL 氟替卡松、50 μg/mL 盐酸组胺、50 μg/mL 苯佐卡因、100 μg/mL 扎那米韦、100 μg/mL 帕拉米韦，不会影响试剂盒检测结果的判定。50 μg/mL 冻干鼻喷流感减毒疫苗有可能会影响甲型流感病毒和乙型流感病毒检测结果，对于使用鼻喷流感减毒疫苗的患者，有可能会出现甲型流感病毒和乙型流感病毒假阳性。

4.最低检出限

申请人使用三批试剂对试剂盒检测范围内病原体亚型的培养物及临床样本（50 株培养物、40 例临床样本）进行最低检出限研究。以检出率≥95%时所对应的浓度水平确定试剂盒的检出限，并进行最低检出限验证。

结果表明试剂盒的最低检出限为 2000 拷贝/mL，对应滴度最低检出限为甲型流感病毒 3.20 TCID50/mL、乙型流感病毒 7.66TCID50/mL 、腺病毒 0.93 TCID50/mL 、呼吸道合胞病毒 0.82TCID50/mL、百日咳鲍特菌 107.48 CFU/mL。

5.包容性

申请人使用三批试剂对具有时间和地理多样性的 3 个不同来源共54 株临床样本进行包容性研究，临床样本包括 H1N1 3 株、09H1N1 3株、H3N2 3 株、H5N1 3 株、H7N9 3 株、B/Victoria 3 株、B/Yamagata3 株、B.P 3 株、Adv1 型 3 株、Adv2 型 3 株、Adv3 型 3 株、Adv4 型3 株、Adv5 型 3 株、Adv7 型 3 株、Adv55 型 3 株、RSVA 亚型 3 株、RSVB 亚型 3 株、M.P 3 株。结果表明试剂盒包容性满足要求。

（四）阳性判断值研究

阳性判断值的确定：选取来不同地区有明确诊断信息的 400 例临床样本进行研究。分别纳入试剂盒检测范围内的 6 种单阳样本及常见混合阳样本，共 273 例阳性样本，阴性样本 127 例，使用本试剂盒进行检测，采用 ROC 曲线法进行统计分析，确定试剂盒各病原体及内参的阳性判断值均为 40。

阳性判断值验证：选取来自不同地区有明确诊断信息的 200 例临床样本进行验证，结果表明，阳性判断值为 40 时，试剂盒检测范围内6 个病原体的检测结果与对比方法的符合率在 99%以上，本试剂盒阳性判断值设置合理。

（五）稳定性研究

申请人对本产品的效期稳定性、冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性进行研究，确定了在各种条件下本产品及样本的有效保存时间。效期稳定性：使用企业参考品对三批试剂按照技术要求检测，分别于试剂盒保存的第 0 个月、6 个月、10 个月、12 个月、15 个月进行稳定性试验；检测结果均符合技术要求。因此，试剂盒按照说明书要求可保存 12 个月，检测性能稳定。此外，申请人对产品的冻融稳定性、运输稳定性和样本稳定性分别进行了研究，结果显示，产品的性能均满足产品说明书声称的要求。

三、临床评价概述

申请人在首都儿科研究所附属儿童医院、广州医科大学附属第三医院和济南市儿童医院共 3 家机构完成了临床试验。入组人群为呼吸道感染的患者，样本类型为咽拭子。针对甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体核酸检测，临床试验采用试验体外诊断试剂与已上市同类产品进行比对，入组病例 2150 例。

针对甲型流感病毒，纳入阳性病例 263 例，阴性病例 1887 例。试验结果显示，阳性符合率为 98.1%（95CI：95.6%，99.2%），阴性符合率为 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）；针对乙型流感病毒，纳入阳性病例 212 例，阴性病例 1938 例。试验结果显示，阳性符合率为 100%（95CI：98.2%，100%），阴性符合率为 99.5%（95CI：99.1%，99.8%）；针对腺病毒，纳入阳性病例 277 例，阴性病例 1873 例。试验结果显示，阳性符合率为 96.4%（95CI：93.5%，98.0%），阴性符合率为99.7%（95CI：99.4%，99.9%）；针对呼吸道合胞病毒，纳入阳性病例 224 例，阴性病例 1926 例。试验结果显示，阳性符合率为 99.6%（95CI：97.5%，99.9%），阴性符合率为 99.2%（95CI：98.7%，99.5%）；针对肺炎支原体，纳入阳性病例 251 例，阴性病例 1899 例。试验结果显示，阳性符合率为 98.8%（95CI：96.5%，99.6%），阴性符合率为 99.3%（95CI：98.8%，99.6%）。

针对百日咳鲍特菌核酸检测，临床试验采用试验体外诊断试剂与Sanger 测序进行比较研究，共入组 2150 例病例，包括阳性病例 352例，阴性病例 1798 例。试验结果显示，阳性符合率为 99.7%（95CI：98.4%，99.9%），阴性符合率为 99.8%（95CI：99.5%，99.9%）。同时还进行了与百日咳鲍特菌培养鉴定的比较，包括培养阳性病例 85例，培养阴性病例 810 例。灵敏度为 98.8%（95CI：93.6%，99.8%），特异度为 70.1%（95CI：66.9%，73.2%）。针对与培养鉴定不一致的样本，均结合 Sanger 测序进行了确认。综上所述，临床试验结果显示本产品与对比方法的一致性较好，满足技术审评要求。

四、产品受益风险判定

本产品根据 YY/T 0316-2016 医疗器械风险管理对本产品的安全风险分析方式，对本产品进行风险分析。

（一）受益评估

产品通过对患者咽拭子样本中的六项呼吸道病原体核酸的定性检测，一次性获得多个病原体的检测结果，避免重复采样可能带来的痛苦，供临床诊断参考，为呼吸道感染性疾病的临床诊疗提供一种更多的辅助诊断方法，提高诊断效率。

（二）风险评估

申请人对已知危险（源）进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险（源）的风险是否达到可接受水平，对合理可行降低的风险、不经过风险/收益分析既判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施进行实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平是否可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

1.与预期用途有关的风险，例如本试剂检测结果应结合患者临床症状及其他相关医学检查结果进行综合分析，不得单独作为患者管理的依据。

2.与储存或运输相关的风险，例如产品储存条件不达标，产品运输条件不达标。

3.与使用有关的风险，例如不合理的样本采集、处理方法，其他样本类型或样本采集、处理方法以及不当的实验操作和实验环境均有可能导致假阴性或假阳性结果；检测芯片使用前请确保八联排 PCR 管与芯片贴合得紧密无缝，如有松动现象应人工安装紧固后再使用；注意轻拿轻放，放置到仪器上时请保证八联排 PCR 管置于仪器上的加热模块内。芯片开封后如暂时不用，请放置于干燥环境内，并尽快使用。

4.与防护有关的风险，仪器使用时需关闭仪器舱门，操作者穿工作服和一次性手套，万一试剂与皮肤、粘膜接触，请立即用自来水冲洗。

5.警示及注意事项：该试剂盒说明书中明确了该试剂盒检查方法的局限性及使用中的注意事项。

综合评价意见

本申报项目为境内第三类体外诊断试剂产品注册。依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第 739 号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第 48 号）等相关医疗器械法规与配套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价, 申报产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，建议准予注册。

2024 年 9 月 6 日

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