【CMDE】人CDO1和CELF4基因甲基化检测试剂盒(PCR-荧光探针法)注册技术审评报告

作者：小编更新时间：2025-02-28 点击数：

受理号：CSZ2300316

体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名称：人CDO1和CELF4基因甲基化检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

产品管理类别：第三类

申请人名称：北京起源聚禾生物科技有限公司

国家药品监督管理局

医疗器械技术审评中心

基本信息

一、申请人名称

北京起源聚禾生物科技有限公司

二、申请人住所

北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地华佗路50号院5号楼4层401室

三、生产地址

北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地华佗路50号院6号楼4层A区、

北京市大兴区中关村科技园区大兴生物医药产业基地华佗路50号院18号楼3层

技术审评概述

一、产品概述

（一）产品主要组成成分

产品试剂盒由以下组分组成，主要组成成分见下表。

表1试剂盒主要组成成分

序号	产品组成	主要成分	规格及装量
			12人份	24人份
1	人C1和C4甲基化反应液	Taq酶、Mg2+、dNTP等	180μL×1管	360μL×1管
2	人C1和C4甲基化引探混合液	引物、探针	60μL×1管	120μL×1管
3	人C1和C4阳性质控品	含相关检测基因甲基化序列的质粒	30μL×1管	60μL×1管
4	人C1和C4阴性质控品	纯化水	30μL×1管	60μL×1管

注：不同批次之间同一组分不可相互替换。

（二）产品预期用途

本试剂盒用于体外定性检测人宫颈脱落细胞DNA中CDO1和CELF4基因的甲基化水平。临床上与超声等其他诊断方法联合用于疑似子宫内膜癌患者的辅助诊断。检测结果阳性不能作为肿瘤早期诊断或者确诊的依据，检测结果阴性也不能排除子宫内膜癌的可能。临床医生应该结合患者病情及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。该检测不宜用于普通人群的肿瘤筛查。

DNA甲基化是表观遗传学中的一种，是在DNA5’端对胞嘧啶进行共价修饰，这种修饰通常与基因沉默相关。异常的甲基化在癌症的发生发展过程中起着重要作用。在以子宫内膜癌患者为对象的甲基化研究中发现，CDO1(CysteineDioxygenaseType1)(简称C1)和CELF4(CUGBPElav-LikeFamilyMember4)(简称C4)基因CpG岛的甲基化水平比正常人明显升高，即发生超甲基化现象。多个病理确诊的子宫内膜癌病理研究报告都表明可以通过检测人宫颈脱落细胞DNA中C1和C4基因的甲基化情况来识别是否发生子宫内膜病变。

（三）产品包装规格

12人份∕盒、24人份∕盒。

（四）产品检验原理

本检测试剂盒采用重亚硫酸盐转化技术和荧光定量PCR技术对基因的甲基化情况进行定性检测，具体如下：

重亚硫酸盐转化：将提取的宫颈脱落细胞DNA利用重亚硫酸盐转化，使未发生甲基化的胞嘧啶转变成尿嘧啶，而发生甲基化的胞嘧啶则不会发生转变；

荧光定量PCR：利用特异性引物结合荧光探针技术，检测DNA样本中是否存在发生甲基化的位点。特异性引物能够选择性地扩增发生甲基化的基因，而荧光探针在Taq酶的作用下水解释放荧光，在实时荧光定量PCR仪上进行DNA样本的甲基化检测。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的选择本产品主要原材料包括：甲基化反应液、引物和探针、菌液，均通过外购的方式获得。其中引物和探针由申请人自行设计，由合成公司经过合成和纯化后获得；菌液基因序列由申请人自行设计，由合成公司负责合成提供。申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性实验筛选出合格供应商，制定了各主要原材料的质量标准并经检验合格。

2.企业参考品和对照品的设置情况包括阴性参考品、阳性参考品、精密度参考品以及最低检测限参考品。

阴性参考品9份，包括不同浓度CDO1和CELF4甲基化均为阴性的样本，其他常见甲基化基因阳性的样本以及含有内、外源性干扰物质样本。阳性参考品9份，包括不同浓度不同甲基化比例的CDO1单基因、CELF4单基因以及CDO1和CELF4双基因甲基化阳性的样本。精密度参考品3份，包括不同浓度不同甲基化比例的CDO1和CELF4双基因甲基化阳性样本以及CDO1和CELF4均为甲基化阴性的样本。最低检测限参考品3份，包括最低检出限水平CDO1单基因、CELF4单基因、CDO1和CELF4双基因甲基化阳性样本。

本产品设置了阴性质控品和阳性质控品各1管，阳性质控品为含相关检测基因甲基化序列的质粒，阴性质控品为纯化水，用于检测过程中的质量控制。

（二）生产工艺及反应体系研究申请人通过功能性实验，最终确定了最佳的生产工艺。申请人通过比较宫腔内和宫颈取样样本检测结果的一致性和宫颈脱落细胞组织来源分析，确定申报产品的适用样本类型。申请人通过对宫颈脱落细胞样本和转化后临床样本等的检测和功能性试验确定了最终反应体系，研究包括：引物探针的浓度、反应液用量、样本用量、PCR反应加样体积、PCR反应条件、细胞保存液、宫颈采样拭子材质、核酸提取试剂盒和亚硫酸盐转化试剂盒的筛选和优化等。

（三）分析性能评估

本产品分析性能评估内容主要包括：准确度、精密度、最低检测限、分析特异性等。申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的三批产品，在适用机型上的性能评估资料。

准确性研究使用三批次试剂盒，对阳性参考品和阴性参考品进行检测，检测结果显示阳性参考品符合率、阴性参考品符合率均为100%。同时使用若干临床样本对试剂盒准确性进行了研究，结果显示试剂盒检测结果与Sanger测序法结果一致，与临床诊断结果具有较高一致性。

精密度研究中，采用三批次试剂盒对阴性临床样本、弱阳性临床样本和阳性临床样本进行了连续20天的检测，统计其检测结果，并对批内、批间、日内、日间、不同操作者之间以及实验室间精密度等进行了评价。研究结果显示试剂盒对不同甲基化水平的临床样本检测结果的Ct值变异系数（CV）均不大于5.0%。

最低检测限研究中，使用三批次试剂盒，采用阴性样本、阳性细胞系混合样本和不同甲基化比例临床样本，采用不同梯度的样本转化量进行检测，最终得出CDO1基因和CELF4基因最低检出甲基化比例为5%，最低转化量为200ng。

分析特异性研究采用三批次试剂盒进行了交叉反应和干扰研究，交叉反应研究结果表明本试剂盒与常见甲基化基因无交叉反应，对目标基因的同源基因无交叉反应。同时，本产品对19种人生殖道寄生微生物以及性传播疾病病原体（包括单纯疱疹病毒II型、梅毒螺旋体、解脲支原体、人型支原体、淋球菌、白色念珠菌、阴道毛滴虫、沙眼衣原体、阴道加德纳氏菌、短小芽孢杆菌、鲍曼不动杆菌、耻垢分枝杆菌、脆弱类杆菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型链球菌）均有良好的检测特异性。本产品对其他女性生殖道肿瘤宫颈癌和卵巢癌均具有良好的检测特异性。干扰实验研究结果显示，甲硝唑含量为10mg/ml、壬苯醇醚栓含量为20mg/ml、抗宫炎胶囊含量为5mg/ml、33%的人体润滑液、血红蛋白5mg/ml、牛血清白蛋白50g/L时，50%宫颈粘液、白细胞含量为1*106cells/mL时均不影响试剂盒对弱阳性样本和阴性样本的检测结果。申请人对CDO1基因和CELF4基因扩增区域进行SNP比对分析，结果显示所有SNP位点均为低频突变位点，对检测不产生潜在影响。

（四）阳性判断值研究

本产品阳性判断值的研究采用宫颈脱落细胞样本937例，其中包含对照组（子宫内膜不典型增生/上皮内瘤样病变、子宫良性样本、其他生殖道良恶性样本）共计705例，阳性组（子宫内膜癌）样本共计232例。以病理结果为金标准，采用ROC曲线法确定每个基因ΔCt值的阳性判断值。申请人对内参基因的范围进行了统计分析，并将内参基因Ct值范围确定为＜32.2。在内参基因符合要求的基础上，利用约登指数最大的原则确定每个基因的最佳阈值，确定CDO1基因ΔCt值的阳性判断值为8.4，CELF4基因ΔCt值的阳性判断值为8.8。并对其结果进行了验证。

（五）稳定性研究

申请人对本产品的实时稳定性、使用稳定性、运输稳定性等进行了研究，确定了在各种条件下试剂的有效保存时间。

实时稳定性研究：采用三批次试剂于-20±5℃条件下避光保存，分别在效期的第0、3、6、8、9、10个月进行阴性符合率、阳性符合率、检测限和精密度检测，均符合要求。确定试剂在-20±5℃条件下避光保存，可稳定保存8个月。

此外，申请人对产品的使用稳定性、运输稳定性和样本稳定性分别进行了研究。结果显示，产品的性能均能满足产品说明书的声称。

三、临床评价概述

申请人在中国医学科学院北京协和医院、复旦大学附属妇产科医院、中南大学湘雅三医院和浙江大学医学院附属妇产科医院共四家临床机构完成了临床试验。采用试验用体外诊断试剂与子宫内膜癌临床参考标准进行比较研究，对产品临床性能进行评价。入组病例为有子宫内膜癌相关症状/体征、临床需进一步检查的疑似子宫内膜癌初诊患者，以及经影像学等非侵入性方法无法决策是否进行宫腔镜检查的病例。样本类型为宫颈脱落细胞样本。临床试验共入组受试者4818例，其中临床参考方法确认子宫内膜癌病例437例，非子宫内膜癌病例4381例，其中不典型增生190例。临床确诊为子宫内膜癌的病例中包括I期246例，II期71例，III期74例，IV期46例；入组病例包括I型子宫内膜癌病例323例，II型子宫内膜癌病例114例；包括不同组织分型的病例，其中子宫内膜样癌323例，浆液性癌36例，透明细胞癌27例，混合型癌29例，癌肉瘤22例等。非子宫内膜癌病例包括子宫良性疾病3991例，其他生殖道肿瘤（宫颈癌和卵巢癌）104例，其他生殖道良性疾病96例等。试验结果显示，本产品与临床参考标准相比，临床灵敏度为94.51%（95%CI：91.94%，96.45%），临床特异度为94.16%（95%CI：93.42%，94.83%）。针对子宫内膜样腺癌，灵敏度为94.12%，针对其他病理类型的子宫内膜癌，灵敏度为95.61%。针对I型子宫内膜癌，灵敏度为94.12%。针对II型子宫内膜癌，灵敏度为95.61%。针对不典型增生病例，灵敏度为83.16%。

此外，临床试验还纳入347例疑似子宫内膜癌病例，采用试验体外诊断试剂与Sanger测序方法进行比较研究，确认本产品的临床检测性能。试验结果显示：针对CDO1基因，阳性病例共195例，阳性符合率为100%（95%CI：98.13%，100%），阴性符合率为96.71%（95%CI：92.49%，98.92%）；针对CELF4基因，阳性病例共217例，阳性符合率为100%（95%CI：98.31%，100%），阴性符合率为96.92%（95%CI：92.31%，99.16%）。上述结果显示两者之间具有良好的一致性，本产品临床检测性能满足要求。

综上所述，该产品临床试验符合技术审评要求。

四、产品受益风险判定

申报产品根据GB/T 42062-2022标准的要求、结合YY/T 1437-2023的指南的要求对人CDO1和CELF4基因甲基化检测试剂盒（PCR-荧光探针法）进行产品受益风险判定。

（一）受益评估

申报产品用于体外定性检测人宫颈脱落细胞DNA中CDO1和CELF4基因的甲基化水平。适用于与超声等其他诊断方法联合用于子宫内膜癌患者的辅助诊断。使患者多了一种无创性子宫内膜癌辅助诊断方法的选择。

（二）风险评估

根据申请人提供的申报资料，经综合评价，在目前认知水平上，认为该产品上市带来的受益大于风险。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，产品说明书明确局限性。

1.预期用途：本试剂盒用于体外定性检测人宫颈脱落细胞DNA中CDO1和CELF4基因的甲基化水平。临床上与超声等其他诊断方法联合用于疑似子宫内膜癌患者的辅助诊断。检测结果阳性不能作为肿瘤早期诊断或者确诊的依据，检测结果阴性也不能排除子宫内膜癌的可能。临床医生应该结合患者病情及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。该检测不宜用于普通人群的肿瘤筛查。

2.警示及注意事项：该试剂盒说明书中明确了该试剂盒检查方法的局限性及使用中的注意事项。

综合评价意见

本申报项目为境内第三类体外诊断试剂产品注册。依据《医疗器械监督管理条例》（国务院令第739号）、《体外诊断试剂注册与备案管理办法》（国家市场监督管理总局令第48号）等相关医疗器械法规与配套规章，经对申请人提交的注册申报资料进行系统评价,申报产品符合安全性、有效性的要求，符合现有认知水平，建议准予注册。

2024年12月16日

附件：产品说明书

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